體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀測試穩定

體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀測試穩定體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀測試穩定

一、 體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀儀器介紹

體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀實驗目的：

本試驗檢測受試物是否引起培養的哺乳動物細胞染色體畸變,以評價受試物致突變的可能性

體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀實驗概述：

在加入和不加入代謝活化系統的條件下,使培養的哺乳動物細胞暴露于受試物中。用中期分裂相阻斷劑（如秋水仙素或秋水仙胺）處理,使細胞停止在中期分裂相,隨后收獲細胞,制片,染色,分析染色體畸變。

大部分的致突變劑導致染色單體型畸變,偶有染色體型畸變發生。雖然多倍體的增加可能預示著有染色體數目畸變的可能,但本方法并不適合用于測定染色體的數目畸變。

體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀應用范圍

應用于科研、農業、衛生、教育、霧霾狀態可吸入顆粒染毒效果研究等各個領域

體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀符合標準：

GB/T 15670.19-2017《農藥登記毒理學試驗方法第19部分:體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗》

二、體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀試驗流程

1）細胞培養

選擇合適細胞系，在含血清培養基中培養至對數生長期。

2）受試物處理

設置多個濃度組（需包括細胞毒性評估，如50%生長抑制濃度）

陽性對照（如絲裂霉suC、環磷酰an等已知誘變劑）

陰性對照（溶劑對照）

3）代謝活化系統（S9混合液）

模擬體內代謝，用于檢測需代謝激活的致突變物（如加Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9）

4）采樣時間

短期處理:1個細胞周期（通常24小時，含或不含S9）

長期處理:覆蓋多個細胞周期（如48小時）

5）染色體制備

秋水仙素（或秋水仙胺）處理:阻斷中期細胞。

低滲處理（KCI溶液）使細胞膨脹。

固定（甲醇:冰醋酸=3:1）后滴片，Giemsa染色。

6）鏡檢分析

顯微鏡下觀察至少200個中期分裂相，記錄畸變類型和頻率。

三、體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀儀器與試劑

關鍵儀器：

培養箱、生物安全柜、離心機、顯微鏡（配備油鏡和圖像分析系統）

染色體自動掃描儀（可選）

主要試劑:

細胞培養基、胎牛血清、胰蛋白mei。

秋水仙素、Giemsa染液、S9混合液